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定氮儀等三款儀器對于蛋白質(zhì)測定分析

更新時(shí)間:2013-05-21      點(diǎn)擊次數(shù):1372

    食品中蛋白質(zhì)含量測定方法多有報(bào)導(dǎo),如凱氏定氮儀法、酚試劑法、雙縮尿法、光度法、甲醛滴定法和電流法等,但都存在著操作繁瑣、費(fèi)時(shí)等不足,而且文獻(xiàn)報(bào)道基本是采用進(jìn)口儀器,不適合一般實(shí)驗(yàn)室使用。經(jīng)典的凱氏定氮儀法是在食品分析、營養(yǎng)和生化研究中廣泛應(yīng)用的方法,但操作也較為繁瑣,耗時(shí)較長,作為本科學(xué)生實(shí)驗(yàn)無法在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成整個(gè)測定過程;同時(shí)大量試劑消耗造成資源浪費(fèi)。
      本文利用控溫消解爐同時(shí)可以消解多個(gè)樣品,利用定氮儀自動(dòng)完成加堿、定量蒸餾吸收。自動(dòng)電位滴定儀具有準(zhǔn)確度高和自動(dòng)化程度高的特點(diǎn)。本文測定糧食中蛋白質(zhì)的含量,對消解條件進(jìn)行了摸索,并與國標(biāo)法進(jìn)行了比對。試劑:K2S04;CuS04•5H2O;H2S04;H3B03;NaOH(試劑均為分析純)。精稱0.1~0.5g糧食樣品于干燥的消解管中,加入0.3gCuS04•5H20、1.0gK2S04和5mLHzS04搖勻,加熱,消解;待反應(yīng)液呈藍(lán)綠色澄清透明后,繼續(xù)加熱10min后取下冷卻至室溫。將上述消解管直接卡于凱氏定氮儀,將裝有20mL硼酸溶液的錐形瓶置于凱氏定氮儀吸收架,加堿至液體呈棕褐色,蒸餾至凱氏定氮儀發(fā)出信號后,取下錐形瓶,并置于全自動(dòng)電位滴定儀,用硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,按上述方法考察試劑空白。按照GB/T5009.5-2003方法進(jìn)行測定Ⅲ。
      實(shí)驗(yàn)考察了樣品量與消化劑用量對測定結(jié)果的影響,當(dāng)樣品量為0.1~0.5g時(shí);CuSO4、K2SO4和H2SO4試劑用量分別為0.39、1.0g和5mL時(shí)消解效果zui為理想,消解速度快,吸收及電位滴定效果較好,其測定值符合要求。當(dāng)樣品量過大時(shí),則消解、吸收、滴定效果均不理想。設(shè)置不同的消解時(shí)間,測定樣品的蛋白質(zhì)含量。加熱10min的測定值與國標(biāo)法測定值接近。取蛋白質(zhì)含量不同的4種樣品,分別加標(biāo)(硫酸銨)回收率實(shí)驗(yàn),硫酸氨的回收率均在99.0%以上。采用本法與國標(biāo)定氮法分別測定4種樣品蛋白質(zhì)含量。結(jié)果表明,兩種方法無顯著性差異(P=0.95)時(shí),量值<2.30,符合要求。取蛋白質(zhì)含量不同的4種樣品,平行測定5次,相對平均偏差(RSD)均小于1.0%,表明該法的精密度良好。
      本方法利用三種儀器測量食品中蛋白質(zhì)的含量,具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,操作簡便、快速、省時(shí)、省力,設(shè)備價(jià)格低,易于推廣,且試劑用量少,降低實(shí)驗(yàn)成本,同時(shí)也減少了對環(huán)境的污染,這不僅能使本科學(xué)生在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程,還可以讓學(xué)生在一般基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室學(xué)到、用到較先進(jìn)的儀器。

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